AAT Bioquest1255 ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction* 

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

 AATReadiLinkRapidiFluor488抗體標記試劑盒

AAT Bioquest1255 ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：1255

產品名稱：ReadiLink™Rapid iFluor®488抗體標記試劑盒*用于標記50微米的微型優化；g每個反應的抗體*

英文名稱：ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*

產品規格：2 Labelings

產品說明：

盡管FITC仍然是制備綠色熒光生物偶聯物zui常用的熒光標記染料，但FITC存在一定的局限性，例如顯微鏡成像的嚴重光漂白和pH敏感熒光。與熒光素衍生物（如FITC）的偶聯物相比，用iFluor® 488染料制備的蛋白質偶聯物要*得多。iFluor® 488偶聯物比熒光素偶聯物明顯更亮，并且更易于光化。此外，iFluor® 488的熒光不受pH值（4-10）的影響。這種pH不敏感性是對熒光素的重大改進，熒光素僅在pH高于9時發出最大熒光。ReadiLink™ 標記試劑盒基本上只需要 2 個簡單的混合步驟，無需色譜柱純化。該ReadiLink™試劑盒中使用的iFluor® 488 SE相當穩定，并且對蛋白質氨基基團具有良好的反應性和選擇性。該試劑盒具有標記~2x50 ug抗體的所有基本成分。試劑盒中提供的兩瓶iFluor® 488染料中的每一個都針對標記~50 μg抗體進行了優化。iFluor 488 SE蛋白標記試劑盒提供了一種使用iFluor®® 10 SE標記單克隆、多克隆抗體或其他蛋白（>488 kDa）的便捷方法。 

組件

組分 A：iFluor™ 488 2 個小瓶（一個小瓶用于 50 μg 蛋白質）

組分B：反應緩沖液 1 瓶 （20 μL）

組分C：TQ™染色淬火緩沖液 1 瓶 （20 μL）

示例協議

一目了然

重要

在打開之前加熱所有組分并短暫離心小瓶，并在開始偶聯之前立即準備所需的溶液。以下協議僅供參考。

工作溶液的制備

蛋白質工作溶液（溶液A）

要標記 50 μg 蛋白質（假設目標蛋白質濃度為 1 mg/mL），請將 5 μL（占總反應體積的 10%）反應緩沖液（組分 B）與 50 μL 目標蛋白質溶液混合。

注意 如果您的蛋白質濃度不同，請相應地調整蛋白質體積，使 ~50 μg 蛋白質可用于標記反應。

注意 要標記 100 μg 蛋白質（假設目標蛋白質濃度為 1 mg/mL），請將 10 μL（占總反應體積的 10%）反應緩沖液（組分 B）與 100 μL 目標蛋白質溶液混合。

注意蛋白質應溶解在1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），pH 7.2 - 7.4中;如果蛋白質溶解在甘an酸緩沖液中，則必須對1X PBS，pH 7.2 - 7.4進行透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（來自密理博的cat#UFC501008）去除廣泛用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽（如**銨和乙**）。

注意 不純抗體或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明膠穩定的抗體不會很好地標記。

注意 為了獲得最佳標記效率，建議最終蛋白質濃度范圍為 1 - 2 mg/mL，當偶聯效率低于 1 mg/mL 時會顯著降低。

實驗方案樣本

運行偶聯反應

1. 將蛋白質工作溶液（溶液A）添加到一瓶標記染料（組分A）中，并通過重復移液幾次或渦旋小瓶幾秒鐘來充分混合。

注意 如果標記 100 μg 蛋白質，請使用兩個標記染料的小瓶（組分 A），方法是將 100 μg 蛋白質分成 2 x 50 μg 蛋白質，并將每 50 μg 蛋白質與一瓶標記染料反應。然后將兩個小瓶合并以進行下一步。

2. 將偶聯反應混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意 如果需要，共軛反應混合物可以旋轉或搖動更長的時間。

停止偶聯反應

1. 將 5 μL（用于 50 μg 蛋白質）或 10 μL（用于 100 μg 蛋白質）添加到共軛反應混合物中，占 TQ™ 染色淬滅緩沖液（組分 C）總反應體積的 10%;混合均勻。

2. 在室溫下孵育10分鐘。標記的蛋白質（抗體）現在可以使用了。

蛋白質偶聯物的儲存

蛋白偶聯物應在載體蛋白（例如 0.5% 牛血清白蛋白）存在下儲存在 > 0.1 mg/mL 下。為了延長儲存時間，蛋白質偶聯物可以凍干或分成一次性等分試樣，并在≤ –20°C下儲存。

 AATReadiLinkRapidiFluor488抗體標記試劑盒

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