LONZA Amaxa 4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

在生命科學(xué)研究中，將DNA、RNA或蛋白質(zhì)引入細(xì)胞，以改變其基因型或表型的過程被稱為轉(zhuǎn)染，在各類研究中十分重要。傳統(tǒng)的電穿孔是一種物理轉(zhuǎn)染方法，通過對(duì)細(xì)胞施加電脈沖，改變細(xì)胞膜的通透性，并通過電場(chǎng)將外源分子移動(dòng)到細(xì)胞中。電穿孔技術(shù)是細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染大型DN段的強(qiáng)大工具，但其高細(xì)胞毒性、轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞和干細(xì)胞的低效率，限制了其廣泛應(yīng)用。


LONZA 4D-Nucleofector（原Amaxa 4D-Nucleofector）細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，創(chuàng)新性地結(jié)合經(jīng)典電穿孔技術(shù)和細(xì)胞特異性電轉(zhuǎn)染液，實(shí)現(xiàn)了DNA、RNA、小分子物質(zhì)高效轉(zhuǎn)染各類哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。

LONZA 4D-Nucleofector技術(shù)不依賴于細(xì)胞有絲，不受細(xì)胞增殖的影響，可直接將外源基因?qū)爰?xì)胞核中，即使是未的原代細(xì)胞（如靜止的T淋巴細(xì)胞或神經(jīng)元），也可以快速表達(dá)。


圖. GFP標(biāo)記的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染新生兒皮膚成纖維細(xì)胞，2小時(shí)后用3.5% PFA 固定，共聚焦顯微鏡可觀察到GFP蛋白在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)。

LONZA Nucleofector對(duì)質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率高達(dá)90％，寡核苷酸（如siRNA）轉(zhuǎn)染效率高達(dá)99％，面世20年來，已成功轉(zhuǎn)染＞1200種細(xì)胞系、＞130種原代細(xì)胞，并在干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等各類較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中獲得了優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效果。

4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染特點(diǎn)
1.針對(duì)每種細(xì)胞優(yōu)化的電脈沖參數(shù)，可將底物導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)甚至是細(xì)胞核；
2.特殊配方的電轉(zhuǎn)染液，同時(shí)提供高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞保護(hù)，提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染后存活率；
3.全程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，從細(xì)胞來源、傳代、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基、到轉(zhuǎn)染后的培養(yǎng)技巧，已形成成熟的實(shí)驗(yàn)方案。



4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)為基因治療研究、免疫治療研究、干細(xì)胞研究等提供了方便的工具。相比電穿孔在內(nèi)的其他非病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，更具優(yōu)勢(shì)：
-采用高分子聚合物電極，避免傳統(tǒng)鋁電極的離子毒害，維持細(xì)胞生理狀態(tài)，提高存活率。
-轉(zhuǎn)染后可快速觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，例如轉(zhuǎn)染GFP后zui快2小時(shí)可觀察到蛋白。
-無需自己優(yōu)化條件，擁有超過650種細(xì)胞類型的現(xiàn)成程序，可直接使用，quan球共享數(shù)據(jù)庫(kù)，超過1500條轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)可供參考。
-可轉(zhuǎn)染包括DNA、mRNA、miRNA、siRNA、肽、蛋白質(zhì)在內(nèi)的多種底物。
-可用于難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)元、細(xì)胞系。
-可不用消化細(xì)胞，進(jìn)行貼壁細(xì)胞的原位轉(zhuǎn)染。
-靈活的轉(zhuǎn)染規(guī)模縮放，可在低、中、高通量中輕松轉(zhuǎn)移，實(shí)現(xiàn)2×10^4至1×10^9個(gè)細(xì)胞數(shù)量的輕松擴(kuò)展。
-已在quan球8000多家同行評(píng)議的出版物中發(fā)表。

最近，LONZA 4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于通過RNAi、CRISPR進(jìn)行的基因編輯研究、以及iPS誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、CAR-T的研究中，在包括功能和結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、藥物發(fā)現(xiàn)以及基因和細(xì)胞療法的研究中大放異彩。

LONZA 4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)參數(shù)

4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)采用模塊化設(shè)計(jì)，可根據(jù)研究者的需求，自行組合數(shù)個(gè)模塊形成一套完整系統(tǒng)。

常用模塊組合參考：
常規(guī)小規(guī)模轉(zhuǎn)染：C+X
貼壁細(xì)胞原位轉(zhuǎn)染：C+Y
懸浮+貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染：C+X+Y
大規(guī)模轉(zhuǎn)染：C+X+LV
摸索復(fù)雜轉(zhuǎn)染條件：C+X+96孔



各模塊功能和應(yīng)用：
1、C模塊：4D-Nucleofector系統(tǒng)的控制單元，內(nèi)置轉(zhuǎn)染程序，將不同的功能單元（模塊）整合為一個(gè)系統(tǒng)，以運(yùn)行不同的應(yīng)用程序。



2、X模塊：用于懸浮細(xì)胞、或貼壁細(xì)胞消化后的小規(guī)模轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)量2×10^4至2×10^7。可同時(shí)轉(zhuǎn)染2個(gè)100μL電轉(zhuǎn)杯、1個(gè)16孔電轉(zhuǎn)板條（每孔20μL），每個(gè)電轉(zhuǎn)杯、每個(gè)孔可獨(dú)立設(shè)置程序。另外在使用96孔模塊時(shí)，也需要X模塊。



3、Y模塊：用于貼壁細(xì)胞不經(jīng)消化的原位轉(zhuǎn)染，可同時(shí)轉(zhuǎn)染1個(gè)24孔電轉(zhuǎn)板條（每孔350μL），每個(gè)孔可獨(dú)立設(shè)置程序。



4、LV模塊：用于同一種懸浮細(xì)胞、或同一種貼壁細(xì)胞消化后的大規(guī)模轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)量1×10^7至1×10^9。可使用1mL手動(dòng)進(jìn)樣電轉(zhuǎn)盤、或20mL連續(xù)進(jìn)樣電轉(zhuǎn)盤。通常使用X模塊小試摸條件，再用LV模塊線性放大轉(zhuǎn)染規(guī)模。



5、96孔模塊：用于同時(shí)轉(zhuǎn)染96個(gè)樣品的細(xì)胞，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)量2×10^4至1×10^6。每個(gè)孔可獨(dú)立設(shè)置程序。必須與X模塊結(jié)合使用。



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