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土壤中性木聚糖酶(Soil Neutral Xylanase,S-NEX)測定試劑盒說明書

更新時間:2025-01-13      瀏覽次數:845


土壤中性木糖酶(Soil Neutral XylanaseS-NEX測定

 試劑盒說明書

微量法 100T/48S

 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養物質的吸收利用,因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中,NEX 一般分離自最適生長pH 6-8 的微生物。

測定原理:

NEX 在中性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與 3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應,在 540nm 處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比,通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率,可計算NEX 活力。

組成:

 

產品名稱

BO6091-100T/48S

Storage

緩沖液:液體

10ml

4℃

試劑一:液體

3ml

4℃避光

試劑二:液體

10ml

4℃避光

說明書

一份

自備儀器和用品:

天平、常溫離心機、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。

樣品理:

新鮮土樣風干,過 30-50 目篩。

測定操作表:

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min,調節波長至 540nm

2操作表



對照管

測定管


土樣g

0.02

0.02

緩沖液μl

150

100

試劑一μl


50

混勻,50℃震蕩反應 30min,立即 90℃水浴 10min8000g25℃離心 10min,取上清

100μl

試劑二μl

100

100

混勻,90℃水浴中顯色 5min,取 180μl 于微量石英比色皿/96 孔板測定 540nm 處吸光值

A,分別記為A 對照管、A 測定管,A=A 測定管-A 對照管。

 

S-NEX 計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線:y = 1.6904x + 0.0058R2 = 0.9989

酶活定義:50℃pH6.0 條件下,每克土壤每天分解木聚糖產生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。

S-NEX 活力(μmol/d/g 土樣)=A-0.0058÷ 1.6904×V 反總×103÷ W÷T÷ 150

= 28.4×A -0.0058÷ W

V 反總:反應總體積,0.15mlT:反應時間,1/48d10001mmol/L =103μmol/L150:木糖分子量。 b. 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.8452x + 0.0058R2 = 0.9989

酶活定義:50℃pH6.0 條件下,每克土壤每天分解木聚糖產生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。

S-NEX 活力(μmol/d/g 土樣)=A-0.0058÷ 0.8452×V 反總×103÷ W÷T÷ 150

= 56.8×A540-0.0058÷ W

V 反總:反應總體積,0.15mlT:反應時間,1/48d10001mmol/L =103μmol/L150:木糖分子量。

注意事項:

1. 保證震蕩反應 30min,使酶與底物充分接觸。

2. 注意 90℃水浴防止爆開,以免改變反應體系。


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